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流感病毒两种超滤方法的研究

来源:核心论文发表 所属分类:医学论文 点击:次 时间:2020-07-23 08:21

  摘要:超滤技术是用于截留液体中目标大小的颗粒,而水和低分子量溶质则允许透过膜。采用世界先进的切向流超滤浓缩技术,分别使用超滤膜包和中空纤维柱对流感病毒(H3N2亚型)超滤浓缩成倍体积,测定血凝价HA。结果HA成倍增加,废液HA呈阴性,病毒回收率达100%。结果表明,两种超滤系统各有优缺点,适用于流感病毒抗原的浓缩。

流感病毒两种超滤方法的研究

  关键词:流感病毒,超滤膜包,中空纤维柱,血凝效价,

  流行性感冒病毒,是正粘病毒科的代表种,包括人流感病毒和动物流感病毒,人流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,是流行性感冒(流感)的病原体。预防用的灭活疫苗对抗原要求比较高。为了增加单位体积康原来,有必要建立流感病毒浓缩的生产工艺流程。采用切向流超滤浓缩,液体以切向流的形式通过高聚材料的半透膜表面,病毒和大于膜截留分子量的有机大分子被膜截留,其他无机盐和低分子流体透过膜滤出为废液。目前多数疫苗生产厂家采用超滤膜包进行超滤浓缩,美国GE Healthcare Life-Sciences Flexstand中空纤维柱为全新产品,此次研究将分别使用Sartorius Sartocon Slice 超滤膜包和GE Healthcare Life-Sciences Flexstand对流感病毒进行超滤浓缩,对超滤时的进出液体的压力、流量等进行控制,对病毒液的超滤浓缩速度进行测算,对病毒透出液、病毒浓缩液进行血凝效价测定分析,评价两种超滤方式的优缺点。

  1材料

  流感病毒(H3N2)毒种:符合毒种规定标准,成都康华生物制品有限公司研发部提供。

  4小结与讨论

  4.1采用传统的膜包和最新的中空纤维柱对流感病毒的超滤,浓缩的数倍体积,HA成倍增加,废液中的HA呈阴性,病毒的回收率将近达100%。

  4.2从超滤操作过程中来看,超滤器的使用比中空纤维柱较为方便。两者的灭菌和清洁处理方面,使用清洁液相同,方法相似。从超滤效率来看,中空纤维柱的等比超滤速度要略高于超滤膜包。

  4.3灭活疫苗的效力与病毒的浓度有直接的关系,为了快速的产生抗体并维持较长的时间,提高病毒浓度是重要手段。

  10日龄SPF鸡胚:成都康华生物制品有限公司研发部提供。

  超滤膜包及夹具:德国Sartorius公司生产。

  中空纤维柱:美国GE Healthcare Life-Sciences公司生产。

  2方法

  2.1病毒液收获 在无菌条件下,万倍稀释流感H3N2亚型毒种,尿囊腔接种10日龄鸡胚,每胚0.2ml,置于温度37℃、湿度55%条件下孵育,收获96h活胚尿囊液,2—8℃保存。

  2.2超滤浓缩 将尿囊液在无菌工艺下分别用超滤设备浓缩至所需倍数。

  2.3测定HA 用96孔微量板法分别测定浓缩前、两种设备超滤浓缩后及废液的HA.

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  3结果

  3.18倍浓缩后的流感病毒的HA变化如表1:

  4小结与讨论

  4.1采用传统的膜包和最新的中空纤维柱对流感病毒的超滤,浓缩的数倍体积,HA成倍增加,废液中的HA呈阴性,病毒的回收率将近达100%。

  4.2从超滤操作过程中来看,超滤器的使用比中空纤维柱较为方便。两者的灭菌和清洁处理方面,使用清洁液相同,方法相似。从超滤效率来看,中空纤维柱的等比超滤速度要略高于超滤膜包。

  4.3灭活疫苗的效力与病毒的浓度有直接的关系,为了快速的产生抗体并维持较长的时间,提高病毒浓度是重要手段。——论文作者:曾伟

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